【课程大纲】

什么是微生物检验员？

微生物检验员怎么获取？企业怎么获取微生物检验员证书？


国际食品微生物专业委员会:国际食品微生物专业委员会

采样基本原则 （1）各种微生物本身对人的危害程度各有不同。 （2）食品经不同条件处理后，其危害度变化情况：①降低危害度；②危害度未变；③增加危害度。 根据（1）（2）的情况来设定抽样方案并规定其不同采样数。

n：系指一批产品采样个数。  c：系指该批产品的检样菌数中，超过限量的检样数，即结果超过合格菌数限量的最大允许数。  m：系指合格菌数限量，将可接受与不可接受的数量区别开。  M：系指附加条件，判定为合格的菌数限量，表示边缘的可接受数与边缘的不可接受数之间的界限。

二级法只设有n、с及m值 以其一点作为食品微生物的限量值，只设合格判定标准m值，超过m值的，则为不合格品。 以生食海产品鱼为例 n=5，c=0，m=102， （n=5即抽样5个，c=0即意味着在该批检样中，未见到有超过m值的检样，此批货物为合格品)。 在中等或严重危害的情况下使用二级抽样方案


一、微生物检验员证书颁发：

CCAA。 

二、微生物检验员证书培训费用：

1480元，费用包含：培训费、资料费、证书费、快递费、发票。 


土壤样品的采集与处理 ：通常不做土壤中微生物检测，只在特殊情况下进行。如大批水果罐头受微生物的污染而变质时，为追查原因而对水果产地的土壤进行检验分析等特殊情况。 样品采集的方法：灭菌刀或灭菌铲出去土壤表层，用灼烧过的勺采取200-300g土壤置于无菌容器中，标明采样地点、深度、时间等。 样品处理的方法：土壤置于灭菌的乳钵中研磨均匀，称取50g于500mL无菌水中，充分震荡混匀后制成1:10的稀释液，再根据检验需求进一步稀释，测定指标微生物（如菌落总数、霉菌、酵母菌等）。

食品微生物样品的采集与处理

一）食品微生物检验的取样方案 ：目的不同，取样方案不同。 国内外使用的采样方案多种多样，如国际食品微生物规范委员会（简称ICMSF）是根据事先给食品进行的危害程度划分而确定（表1-3），我国则根据事先对食品类别的划分而确定（表1-4）。


三、微生物检验员证书培训内容

1.检验的化学基础;

2.实验室安全知识;

3.实验室常用仪器讲解;

4.检验技术及微生物检验技术，大肠杆菌，菌落总数，无菌、药典、霉菌、酵母菌、金色葡萄球菌，志贺氏菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌等菌种的实操视频。 

四、微生物检验员证书培训相关


1．取经37℃培养18-24小时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、铜绿假单胞菌 10104肉汤培养物、 生孢梭菌 64941硫乙醇酸盐培养物1ml+9ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-7为50~100个/ml，做活菌计数备用 2．取经25℃ 培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9 ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-6为50~100个/ml，做活菌计数备用 3．取经25℃ 培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加3~5ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液， 用标准比浊管比浊，与浊度相当后，取1 ml +9 ml盐水=10-1，逐管10倍稀释为10-4约50~100个/ ml，做活菌计数备用

结果判断：供试品组的菌回收率、稀释剂对照组的菌回收率。 试验组的菌回收率=[（试验组平均菌落数–供试品对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数 ]×100% 稀释剂对照组的菌回收率=[（稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数）]×100% ●判断标准: 菌回收率均不低70% 。

试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。 ●阴性对照菌株:设立阴性对照菌是为了验证该控制菌检查方法的专属性。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌用大肠埃希菌；大肠埃希菌、沙门菌、大肠菌群用金黄色葡萄球菌。 ●菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 ●菌液制备:10～100cfu/ml。


五、微生物检验员证书相关

样品的种类

大样： 就是一整批；
中样： 是从样品中各部分取得的混合样品，  
        一般为200g；
小样： 也称检样，做分析用的，一般为25g。
采样原则：
根据检验目的设计科学的取样和样品制备方案： 取样方案主要取决于检验的目的，目的不同，取样方案也不同。 在采样过程中，对各种影响因素要考虑周全,要防止样 品受到外界污染，还要防止样品变质和有细菌生长。

采样的步骤 ：采样前调查→现场观察→确定采样方案→采样 →样品封存 →开具采样证明



注意事项： 向容量瓶中转移溶液时必须用玻璃棒； 不能用手掌握住瓶身，以免造成液体膨胀； 当容量瓶内的容积达到3/4左右时，将容量瓶摇动几周（勿倒转），使溶液初步混匀，然后把容量瓶放在桌子上，慢慢加水到接近标线1cm左右，等1-2min，使粘附在瓶颈内壁的溶液留下，加水至弯液面下最低点与标线相切； 热溶液应冷却至室温才能注入容量瓶，否则可造成体积误差； 容量瓶不能久贮溶液，尤其是碱液，会腐蚀玻璃使瓶塞粘住，无法打开； 容量瓶用毕，应用水冲洗干净； 如长期不用，将磨口处洗净吸干，垫上纸片。

滴定管是为了放出不确定量液体的容量仪器。 分类：酸式滴定管（盛放酸性、中性、氧化性溶液）、碱式滴定管（盛放碱液） 使用：洗涤、涂油、试漏、润洗、装液、排气 洗涤：无明显油污的滴定管，直接用自来水冲洗。若有油污，则用铬酸洗液洗涤。碱式滴定管洗涤时，要注意不能使铬酸洗液直接接触橡皮管。 涂油：用滤纸擦净活塞和塞座，用手指蘸少量凡士林，在活塞两端涂上薄薄一层。把活塞垂直插入塞座内，向同一方向作圆周运动，直到从外面观察，凡士林均匀透明为止。如果涂油太多，很容易将出口管尖堵塞，可先用水充满全管，将出口端浸入热水中，温湿片刻后，打开活塞，使管内的水流突然流出，将溶化的油脂带出。



非水溶性供试品 ：增加"十四烷酸异丙酯法"（如油溶膏剂等） 。 ●结肠溶制剂供试品 ：用pH7.6无菌磷酸盐 缓冲液溶解。 ●气雾剂、喷雾剂供试品：冷冻1小时，放尽抛射剂，药液加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨B.S。 ● 具抑菌活性的供试品：增加方法的可操作 性（细化）。

培养基及稀释剂等灭菌:采用验证合格 的灭菌程序进行灭菌。

稀释剂：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液（增 加检出率，对被破坏的微生物有复 苏作用） pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 pH7.6无菌磷酸盐缓冲液

培养时间:必要时，可适当延长培养时间至5～7天 . ●点计：逐日点计. ●同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15时，则两个平板菌落数不能相差1倍或以上。 ●培养基平板上生长特殊菌落：以菌落数高的培养基中的菌数为记数结果。 ●菌数报告规则：（1）、（2）、（3）、（4）。


微生物检验员证书



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【讲师介绍】

微生物检验员
食品化学微生物实验室
医疗器械行业申请GMP
化妆品行业

【培训对象】

1.企业主管食品质量、安全标准及监督管理工作岗位的人员、食品生产企业、经销单位、质量监督部门、卫生检验部门及有关科研、管理部门的管理人员、技术人员和检验人员。

更新时间：2024/9/30 8:24:37