【课程大纲】

GB4789.3-2016大肠菌群平板计数法细节解读-圣问技术职业技能培训中心V：stspx134
一、无需高压灭菌的VRBA培养基配制使用问题

1.所用器皿是否需要灭菌？

答：不需要。配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留，且晾干无水渍。煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般用锡箔纸覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。

2.如何保持培养基"煮沸2min"？

答：培养基加热煮沸至完全溶解一般采用电陶炉或电热炉进行，但培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。因此，要做到"煮沸2min"，则需在该培养基即将煮沸时调低温度，待培养基一沸腾就马上移离热源，待培养基停止沸腾后，又继续加热至沸腾状态又移开，这样间歇性煮沸2min。（注意规范操作，做好防烫措施，避免烫伤）

3.若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？

答：不可以。4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌。

4.倾注完成后是否需要"覆盖一层"？如何覆盖？

答：需要覆盖。因为培养基冷却后在表面容易形成一些冷凝水，菌落容易蔓延开，所以在倾注完成后，再覆盖一层培养基，则菌落不容易接触到水，这样不易形成蔓延菌落。在检验中最好都进行覆盖，最好是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（"一层"是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。

二、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？

答：不要去管什么是大肠菌群的典型形态，建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验非常简单，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心了。建议平时多配一些BGLB肉汤管冷藏储存备用，需要进行证实试验时分分钟可以完成试验。

三、两个梯度都长了菌，如何选取？如何进行证实试验？菌落选取数量？

答：选取15-150CFU之间的平板（指的是VRBA平板上所有菌落数在此范围），挑取可疑菌落进行证实试验。详细举例说明：若有两个连续梯度的4个平板上菌落数均在15-150之间，则4个平板上的菌落都要挑取进行证实试验，实际操作时，可灵活操作，如：1:10的两个平板上的菌落数分别为120、123，1:100的两个平板的菌落数分别为16、18，严格来讲必须至少在每个平板上分别挑取5个可疑菌落、5个典型菌落进行证实试验。建议使用镍合金接种环（即传统的接种环，而不是一次性塑料接种环），因为VRBA上生长的菌落（无论典型或可疑）大部分长在底层、且菌落一般较大，被培养基覆盖，传统的接种环较细，用以刮去上层培养基较方便，挑取菌落也较方便。

确证试验注意：1）.每种可疑菌落挑取5个，每个菌落放入1管GBLB管中；2）"产气者，记为大肠菌群阳性管"，就要求在实验前须认真筛选BGLB管，凡小导管中有气泡的GBLB管应先排去导管中的气泡再使用。

BGLB确证阳性结果

四、结果如何计算？

答：首先，在VRBA培养24h后进行计数，分别计数可疑大肠菌群和典型大肠菌群的数量。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100X6/10X104/g（mL）=6.0X105 CFU/g（mL）。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

五、若所选适合计数梯度平板上可疑和典型菌落，最终证实全部为阴性，结果如何计算？

答：根据第3条,选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验，若证实全部为阴性，则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落（建议可疑和典型菌落分别挑取10个）进行证实试验，若第二次证实试验均呈阴性，以＜1乘以最低稀释度进行计算，如：1:10的平板菌落数分别为120、123，1:100的平板上菌落数分别为16、18，首先挑取1:100的两个平板上的菌落进行证实试验，若全部为阴性，再挑取1:10的两个平板上的菌落进行证实试验，若1:10的平板上的菌落数证实为阴性，则最终计算过程为＜1x10，最终结果为＜10；若1:10的的平板上的菌落有阳性管，则按照第5条进行计算。

【讲师介绍】

张老师qq134 8799 257 手机 微信134 1208 6256、李老师、范老师、朱老师、许老师、陈老师、文老师、鲁老师、黄老师、林老师、王老师、崔老师、伍老师等：专业师资、计量认证权威机构、技能培训专业机构、技术服务称心机构--广州圣问技术服务有限公司--圣问技术认证服务中心--stspx134，你满意的合作伙伴。

一、食品检验员培训对象：

  企业主管食品质量、安全标准及监督管理工作岗位的人员、食品生产企业、经销单位、质量监督部门、食品卫生检验部门及有关科研、管理部门的管理人员、技术人员和检验人员;单位中从事从事农副产品生产加工、粮油及制品、餐饮、糕点糖果、乳及乳制品、白酒果酒黄酒、啤酒、饮料、罐头、肉类及制品、调味品酱货腌制品、茶叶、食品及食品内包装材料、容器、洗涤剂、消毒剂和用以食品生产经营的工具、设备的生产经营岗位，用抽样检查方式对各类食品的成分、添加剂、农残、及卫生、毒性、微生物等指标进行测试检验的人员;各类食品、化学专业院校的在校学生。

  二、食品化验员培训内容：

  按照国家标准大纲制定的要求对食品检验初级、中级、高级技术人员必须掌握的基础知识和专业知识,检验技术及检验操作技能，食品行业的基本的法律法规等主要内容包括：

  食品检验的感官检验技术 食品检验的化学基础 实际操作技能培训食品专业分析与检验技术 化学分析与检验技术 仪器分析与检验技术食品检验的微生物检验技术 误差分析与数据处理 食品检验概述

  三、食品检验工培训目的：

  通过学习使学员检验水平能达到国家职业技能鉴定大纲要求，掌握基本的理论和专业知识，按着国家劳动和社会保障部规定的食品检验初级、中级、高级职业资格要求，取得相应级别的职业资格证书，并能持证独立上岗操作。

  参考文件

  《中华人民共和国食品安全法》

  《中华人民共和国食品安全法实施条例》

  《中华人民共和国认可条例》

  《食品检验机构资质认定管理办法》

  《实验室资质认定评审准则》

  《食品检验机构资质认定条件》

  随时可报名(具体地点留意通知函信息指引，;包括从事粮油及制品、糕点糖果、乳及乳制品、白酒果酒黄酒、啤酒、饮料、罐头、肉蛋及制品、调味品酱货腌制品、茶叶、食品添加剂及食品内包装材料等岗位，用抽样检查方式对各类食品的成分及卫生、毒性等指标进行测试检验的人员。

  从事的工作主要包括：(1)采集样品;(2)配制标准溶液;(3)使用培养箱、显微镜等仪器设备检验样品的微生物含量;(4)检验样品的微量金属元素、微量非金属元素及理化指标(5)记录、计算、判定检验数据;(6)协助主检人员完成检验报告;(7)检查、维护仪器设备;(8)负责检验室卫生、安全工作。

【培训对象】

广州、上海、北京、天津、重庆、深圳、南京、杭州、福州、济南、合肥、郑州、西安化学检验员职业资格证书报考条件?宜宾、泸州、乐山、雅安、广元、达州、南充、绵阳、汶川、攀枝花、成都、遵义、三穗、毕节、都匀、贵阳、南宁、曲靖、保山、大理、思茅、香格里拉、石林、开远、昆明、三亚、海口、衡阳、邵阳、永州、郴州、岳阳、株洲、湘潭、怀化、常德、张家界、长沙化验员证书考试地址?承德、唐山、秦皇岛、沧州、石家庄、沈阳、西宁、太原、呼和浩特、大连、青岛、宁波、厦门、苏州、南通、无锡、泰州、镇江、扬州、盐城、徐州、淮安、连云港、常州化学检验工资格证书报考条件?宜芜湖、安庆、蚌埠、亳州、黄山、温州、嘉兴、绍兴、湖州、金华、衢州、丽水、舟山、台州、漳州、宁德、莆田、南平、三明、龙岩、泉州、微生物检验员考试地址?昌、荆州、襄樊、十堰、恩施、武汉、新干、萍乡、景德镇、鹰潭、泰和、瑞金、赣州、九江、南昌、邯郸、保定、张家口、潍坊、烟台、威海、日照、临沂、济宁、菏泽、滨州、德州、淄博、洛阳、新乡、许昌、漯河、平顶山、信阳、周口、驻马店、南阳、三门峡、济源、焦作、安阳、开封化学检验员考试时间?东莞、中山、珠海、清远、汕头、汕尾、潮州、揭阳、河源、梅州、茂名、云浮、湛江、惠州、江门、肇庆、柳州、防城港、北海、贺州、桂林、钦州、梧州、玉林化妆品化验员培训地址?】等各地均有开办)

更新时间：2022/11/9 22:02:34