GB4789.3-2016大肠菌群平板计数法细节解读
课程类型：	资格认证	授课语言：	普通话
总学课时：	2天	培训费用：	1元
授课时间：	2024年12月28日至2054年12月29日	授课地点：	上海
浏览次数：	5617次	参加培训：	在线报名

GB4789.3-2016大肠菌群平板计数法细节解读-圣问技术职业技能培训中心V：stspx134
一、无需高压灭菌的VRBA培养基配制使用问题

1.所用器皿是否需要灭菌？

答：不需要。配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌，但要求一定要清洗干净，表面无污渍、无残留，且晾干无水渍。煮沸完成后，取下锥形瓶，用一般用锡箔纸覆盖瓶口，用橡皮筋缠绕，待冷却至适宜温度即可倾注培养基。在倾注培养基时，须点燃酒精灯，稍微灼烧锥形瓶口。

2.如何保持培养基"煮沸2min"？

答：培养基加热煮沸至完全溶解一般采用电陶炉或电热炉进行，但培养基很难保持煮沸2min，一旦煮沸，则培养基很快上涌、翻腾，若不调低温度或立刻采取其他措施，则培养基可在数秒内喷涌出来，严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围（实验室危险因子之一）。因此，要做到"煮沸2min"，则需在该培养基即将煮沸时调低温度，待培养基一沸腾就马上移离热源，待培养基停止沸腾后，又继续加热至沸腾状态又移开，这样间歇性煮沸2min。（注意规范操作，做好防烫措施，避免烫伤）

3.若培养基未用完，是否可以冷藏起来下次用？

答：不可以。4789.28中已规定，固体培养基最多允许熔融1次（指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用）。且VRBA培养基冷却后，再次熔融时非常容易喷涌，若温度控制不当，底部培养基熔融后很快就会发生喷涌。

4.倾注完成后是否需要"覆盖一层"？如何覆盖？

答：需要覆盖。因为培养基冷却后在表面容易形成一些冷凝水，菌落容易蔓延开，所以在倾注完成后，再覆盖一层培养基，则菌落不容易接触到水，这样不易形成蔓延菌落。在检验中最好都进行覆盖，最好是在原培养基已凝固或半凝固（不会发生晃动）时再倾注一层培养基（"一层"是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿）。

二、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群？

答：不要去管什么是大肠菌群的典型形态，建议新手们认真按照标准进行证实试验，此证实试验非常简单，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心了。建议平时多配一些BGLB肉汤管冷藏储存备用，需要进行证实试验时分分钟可以完成试验。

三、两个梯度都长了菌，如何选取？如何进行证实试验？菌落选取数量？

答：选取15-150CFU之间的平板（指的是VRBA平板上所有菌落数在此范围），挑取可疑菌落进行证实试验。详细举例说明：若有两个连续梯度的4个平板上菌落数均在15-150之间，则4个平板上的菌落都要挑取进行证实试验，实际操作时，可灵活操作，如：1:10的两个平板上的菌落数分别为120、123，1:100的两个平板的菌落数分别为16、18，严格来讲必须至少在每个平板上分别挑取5个可疑菌落、5个典型菌落进行证实试验。建议使用镍合金接种环（即传统的接种环，而不是一次性塑料接种环），因为VRBA上生长的菌落（无论典型或可疑）大部分长在底层、且菌落一般较大，被培养基覆盖，传统的接种环较细，用以刮去上层培养基较方便，挑取菌落也较方便。

确证试验注意：1）.每种可疑菌落挑取5个，每个菌落放入1管GBLB管中；2）"产气者，记为大肠菌群阳性管"，就要求在实验前须认真筛选BGLB管，凡小导管中有气泡的GBLB管应先排去导管中的气泡再使用。

BGLB确证阳性结果

四、结果如何计算？

答：首先，在VRBA培养24h后进行计数，分别计数可疑大肠菌群和典型大肠菌群的数量。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100X6/10X104/g（mL）=6.0X105 CFU/g（mL）。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

五、若所选适合计数梯度平板上可疑和典型菌落，最终证实全部为阴性，结果如何计算？

答：根据第3条,选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验，若证实全部为阴性，则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落（建议可疑和典型菌落分别挑取10个）进行证实试验，若第二次证实试验均呈阴性，以＜1乘以最低稀释度进行计算，如：1:10的平板菌落数分别为120、123，1:100的平板上菌落数分别为16、18，首先挑取1:100的两个平板上的菌落进行证实试验，若全部为阴性，再挑取1:10的两个平板上的菌落进行证实试验，若1:10的平板上的菌落数证实为阴性，则最终计算过程为＜1x10，最终结果为＜10；若1:10的的平板上的菌落有阳性管，则按照第5条进行计算。

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一、食品检验员培训对象：

  企业主管食品质量、安全标准及监督管理工作岗位的人员、食品生产企业、经销单位、质量监督部门、食品卫生检验部门及有关科研、管理部门的管理人员、技术人员和检验人员;单位中从事从事农副产品生产加工、粮油及制品、餐饮、糕点糖果、乳及乳制品、白酒果酒黄酒、啤酒、饮料、罐头、肉类及制品、调味品酱货腌制品、茶叶、食品及食品内包装材料、容器、洗涤剂、消毒剂和用以食品生产经营的工具、设备的生产经营岗位，用抽样检查方式对各类食品的成分、添加剂、农残、及卫生、毒性、微生物等指标进行测试检验的人员;各类食品、化学专业院校的在校学生。

  二、食品化验员培训内容：

  按照国家标准大纲制定的要求对食品检验初级、中级、高级技术人员必须掌握的基础知识和专业知识,检验技术及检验操作技能，食品行业的基本的法律法规等主要内容包括：

  食品检验的感官检验技术 食品检验的化学基础 实际操作技能培训食品专业分析与检验技术 化学分析与检验技术 仪器分析与检验技术食品检验的微生物检验技术 误差分析与数据处理 食品检验概述

  三、食品检验工培训目的：

  通过学习使学员检验水平能达到国家职业技能鉴定大纲要求，掌握基本的理论和专业知识，按着国家劳动和社会保障部规定的食品检验初级、中级、高级职业资格要求，取得相应级别的职业资格证书，并能持证独立上岗操作。

  参考文件

  《中华人民共和国食品安全法》

  《中华人民共和国食品安全法实施条例》

  《中华人民共和国认可条例》

  《食品检验机构资质认定管理办法》

  《实验室资质认定评审准则》

  《食品检验机构资质认定条件》

  随时可报名(具体地点留意通知函信息指引，;包括从事粮油及制品、糕点糖果、乳及乳制品、白酒果酒黄酒、啤酒、饮料、罐头、肉蛋及制品、调味品酱货腌制品、茶叶、食品添加剂及食品内包装材料等岗位，用抽样检查方式对各类食品的成分及卫生、毒性等指标进行测试检验的人员。

  从事的工作主要包括：(1)采集样品;(2)配制标准溶液;(3)使用培养箱、显微镜等仪器设备检验样品的微生物含量;(4)检验样品的微量金属元素、微量非金属元素及理化指标(5)记录、计算、判定检验数据;(6)协助主检人员完成检验报告;(7)检查、维护仪器设备;(8)负责检验室卫生、安全工作。

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